凝集素组织化学技术不但可更好的验证凝集素芯片结果，而且能定位各凝集素识别糖链在组织或细胞中的分布。凝集素组化技术的最基本原理是凝集素与对应糖链结构相互特异性结合。通过针对标本上要研究的糖链结构选择适当凝集素并标记荧光或显色剂，使该凝集素在激光显微镜或光学显微镜下可发荧光或肉眼可见，以检测是否有对应糖链存在。凝集素可被荧光素、酶和生物素等所标记，染色法可分为以下三种，直接法：标记物直接标记在凝集素上，使之直接与切片中的相应糖蛋白糖链或糖脂糖链相结合；间接法：将凝集素直接与切片中的相应糖基结合，而将标记物结合在抗凝集素抗体上；糖－凝集素－糖法：本法是利用过量的凝集素与组织切片中特定的糖链相结合。经冲洗后，凝集素上还存在未被占用的结合部位，将这些部位与有过氧化物酶标记的特异性糖链相结合，形成一个三明治样的糖－凝集素－糖的结合物。

       本研究室广泛应用凝集素组化技术于诸多领域，例如将其用于分析 TＧF-β１诱导肝星状细胞(LX-2)糖链表达.肝星状细胞（HepticStellate Cells，HSCs）是肝脏合成细胞外基质的主要细胞。HSCs的活化与增殖是肝纤维化形成的中心环节。HSCs经转化TGF-β1诱导可活化。本实验利用凝集素组化技术对“静态”HSCs 和经诱导活化的HSCs进行糖链表达分析，研究肝纤维化过程中肝星状细胞蛋白糖基化修饰的变化。整个实验过程包括细胞培养；细胞爬片；凝集素Cy3标记，分离与定量；爬片封闭；孵育组织切片以及DAPI染色，封片等。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Yannan Qin, YaoGang Zhong, LiuYi Dang, Minzhi Zhu, HanJie Yu, Wentian Chen, Jihong Cui, Huijie Bian, Zheng Li.(2012) Alteration of protein glycosylation in human hepatic stellate cells activated with transforming growth factor-β1. Journal of Proteomics. 75(13):4114-23.

       根据多种凝集素组化可以对诸多研究有所启发，岩藻糖化是一种最常见的糖基化修饰，通过 α1-2 ， α1-3/α1-4 和 α１-6等连键方式将岩藻糖残基加入Ｎ-糖链、 Ｏ-糖链或糖脂上。岩藻糖基化水平的增加被认为发生在很多病理状态下，如炎症和癌症。在活化态HSCs中蛋白岩藻糖基化水平总体呈升高趋势，但不同连接方式的岩藻糖以不同的方式表达在不同的区域。如在活化态 HSCs中，Fuc α1-6 GlcNAc 和Fuc α１-３Gal β1-4 GlcNAc的表达增加，而 Fuc α1-2 Ｇａｌβ1-4 Glc(NAc)和 Fuc α-LacNAc-Man的表达减少。同时，Fuc α1-2 Gal β1-4 Glc(NAc)主要表达在静息态HSCs的核周胞质区，而在活化态HSCs的相同区域表达减弱。Fuc α1-6 GlcNAc 和Fuc α1-3 LacNAc主要表达在静息态HSCs的中央胞质区，而在活化态HSCs的相同区域表达增强。